生命经纬专题

  聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR),是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的方法,也是分子生物学实验最常用到的一种方法。根据适用对象的不同,又有荧光实时PCR、逆转录PCR等区别。本专题详细介绍了PCR实验的基本原理、步骤及常见问题的解决办法。

  ·PCR引物设计的原则生命经纬 www.biovip.com
  PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功,但遵循某些原则,则有助于引物的设计。[详细][到论坛参与讨论]

  ·常用的PCR引物设计软件:Primer Premier和Oligo生命经纬 www.biovip.com
    本文旨在介绍使用软件设计PCR引物的技巧。在PCR引物设计原则的基础上,详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法,并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件,而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件。[详细][到论坛参与讨论]

  ·背景知识:引物合成介绍及常见问题 生命经纬 www.biovip.com
  目前,引物的合成价格已经很便宜,其操作一般交由专业的公司完成。但你了解引物合成的原理吗?你知道引物合成完成到最终使用还要经过哪些过程吗?引物的合成会出错吗?了解这些,将对你的实验大有裨益。[详细][到论坛参与讨论]

PCR的基础知识  

  PCR实验技术发展史 1985年,美国PE-Cetus公司的人类遗传研究室 Mullis等人发明了PCR,并于1993年获得诺贝尔奖。[详细]

  PCR实验的基本原理 PCR是在试管中进行DNA复制反应。用加热(变性)、冷却(退火)、保温(延伸)等改变温度的办法使DNA得以复制。[详细]

  引物的稀释和使用 介绍引物合成后,如何稀释成自己需要的浓度以及引物如何保存。[详细]  

    Real-time PCR与RT-PCR 这是两种不同的PCR技术,前者用荧光的方法来定量模板浓度,后者用于RNA到cDNA转录及扩增。[详细]

  ·PCR标准反应体系与反应条件生命经纬 www.biovip.com
  PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。PCR反应条件为温度、时间和循环次数。 反应体系的配制及反应条件的选择是PCR式样成功的关键。[详细] [到论坛参与讨论]

  ·PCR反应条件的选择及优化生命经纬 www.biovip.com
  PCR技术已经在生物学研究和临床医学检验领域中得到了广泛的应用,PCR技术也日臻完善。PCR技术操作简便,特异性强,敏感度极高,正因为敏感度高,很容易受其他因素的影响,因此要得到准确可靠的反应结果,需根据不同的模板,摸索最适合的条件,配制出PCR反应试剂。[详细] [到论坛参与讨论]

  ·PCR反应的常见问题总结生命经纬 www.biovip.com
  在这篇文章中,作者在总结自己实验的基础上,详细描述了PCR引物设计、PCR反应条件设定时遇到的问题及解决方法,并列举了4种提高PCR反应特异性的方法。同时,作者也对产物测序的方式及PCR污染及对策做出了详细的分析,推荐阅读![详细] [到论坛参与讨论]

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  ·琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳
  PCR扩增反应完成之后,必须通过严格的鉴定,才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物。凝胶电泳是检测PCR产物常用和最简便的方法,能判断产物的大小,有助于产物的鉴定。凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳,前者主要用于DNA片段大于100bp者,后者主要用来检测小片段DNA。 [详细] [到论坛参与讨论]

  ·PCR产物测序样本的准备
  PCR产物电泳后,为了保证产物是真正的目的片段而非假阳性,必须割胶后进行测序。PCR技术与自动测序技术相结合后,它将成为一种最快、最有效的测定核苷酸序列的方法。本章主要综述各种测模板的制备以及如何完成PCR产物的直接测序。[详细] [到论坛参与讨论]

  ·PCR产物克隆方法
  当PCR产物过少影响测序结果,或者需要大量的PCR产物用于后续实验时,需要对实验得到的PCR产物进行扩增(即克隆)。其通用的方法是把PCR扩增后的产物连接到相应的载体后,再转移到相应的细菌菌株中扩增。本文介绍了不同情况下PCR产物与载体连接的一般原理及方法。[详细] [到论坛参与讨论]

 
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