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   免疫测定(immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法,其基本原理是抗原抗体的特异性识别。酶联免疫吸附试验 (enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是实验室比较常用的免疫检测方法。本专题为您详细讲解免疫检测中的基础知识实验操作步骤影响因素及 质量控制

免疫学检测基础知识

抗原、抗体:抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。。>>详细

抗原抗体反应:抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,具有特异性、可逆性、敏感性3个重要性质。>>详细

在临床检验中的应用:由于各种抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体,利用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原,因此免疫测定的应用范围极广 。>>详细

免疫学检测技术

常用的免疫学检验技术:      >>详细

皮内试验 (intrader rpmal test,ID)
免疫扩散(immunodiffusion)和免疫电泳(immunoelectrophoresis)
间接红细胞凝集试验(indirect haemagglutination test,IHA)
间接荧光抗体试验 (indirect fluorescent antibody method,IFA)
对流免疫电流试验 (counter-immunoelectrophoresis,CIE)
酶联免疫吸附试验 (enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)
免疫酶染色试验 (immunoenzyme staining test,IEST)
免疫印迹试验(immunobloting technique,ELIB)

扩展阅读:

 
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ELISA的原理与类型

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型:双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞争法测抗原、捕获包被法测抗体(经典方法)和ABS-ELISA法。>>详细

抗原抗体反应

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ELISA的试剂

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:    >>详细
    (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
    (2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
    (3)酶的底物;
    (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
    (5)酶联物(结合物)及标本的稀释液;
    (6)洗涤液;
    (7)酶反应终止液。

 

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ELISA实验Protocol

ELISA实验常用Protocol
    在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。 >>详细

ELISA试验条件的选择
    包括固相载体的选择、载体的吸附条件、酶标抗体使用浓度的确定、抗原、抗体、清洗液和反应时间等7个要素  >>详细

ELISA的操作要点
    本文叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELISA,国外试剂均与特殊仪器配合应用  >>详细

ELISA试验举例
    >>ELISA(双抗体夹心法)—检测HBsAg
    >>ELISA法测定单克隆抗体的效价
    >>用ELISA法检测幽门螺杆菌抗体
    >>ELISA测定伤寒杆菌“O”抗体
    >>猪瘟单克隆抗体ELISA 
    >>牛副结核ELISA

 


    ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA 的影响因素较多,加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。
质量控制(Quality Control,QC)概述

全面质量管理的宗旨在于预防差错的产生。质控图的统计学质控的目的是检出差错。统计学的实验室室内质控是全面质量管理中的一个重要环节。 >>详细

分析前质控

人员培训实验是人操作的,因此检验人员需经过培训。本文介绍分析前质量控制应该熟练掌握的几方面的技术知识。 >>详细

分析中质控

每个步骤包括加样,温育,洗涤,显色,酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA 的高灵敏,强特异的优点。因此,应建立实验项目的SOP。  >>详细

ELISA的质量控制

本文在免疫检测质量控制的相关知识基础上,详细分析ELISA试验中可能遇到的质控问题。  >>详细

ELISA试剂的临床质量评价

ELISA试剂的评价(evaluation)分两个方面:一是试剂本身的质量评价,符合一定要求后才能生产供应;一是在临床应用中效果的评价。 >>详细

 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

guide

测定技术的发展主要在于方法学的发展,而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前,分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识,其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的,它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举,并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。


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